Chọn lọc và nhân sinh khối nấm Trichoderma đối kháng với nấm gây hại cây trồng và các tác nhân khác (phần 3)

Thu thập và phân lập nấm + Thu thập mẫu nấm Trichodema: Tùy theo loại cây trồng, địa bàn lấy mẫu, trong một ruộng hay một vườn cây chọn những nơi đất mùn, nhiều xác cây chết dùng dao xén lấy 50g đất. Trên cây, chọn những nơi vết bệnh mới vừa lành, cạo lấy khoảng 5g. Tất cả mẫu được lấy cho vào túi nylon. Ghi lý lịch mẫu và lưu trữ ở 4oC cho đến khi phân tích. Sử dụng các chữ cái T và số thứ tự ký hiệu vùng lấy mẫu. Ngoài ra còn chọn thêm chọn thêm một mẫu sản phẩm từ nước ngoài đây là sản phẩm của Công ty Sun Agro – Ấn Độ gửi mẫu giới thiệu ở Việt Nam. + Phân lập nấm Trichodema: Mẫu đất, mẫu tại vết bệnh tại mỗi điểm thu được trộn đều. Cân 10 gram đất (hay 1 gram mẫu bệnh) cho vào bình tam giác dung tích 250ml với lượng nước cất theo tỷ lệ 1:10, lắc mạnh trên máy lắc hiệu ORBITAL INCUBATOR (SI 50) ở 150-180 vòng/phút, ở nhiệt độ 28oC. Dùng micro – pipet hút 1ml dung dịch trích cho vào ống nghiệm có chứa sẵn 9ml nước cất, lắc đều và tiếp tục pha loãng ở tỷ lệ 10-5 . Ở mỗi nồng độ khác nhau dùng micro-pipet hút 0,1ml dung dịch rồi cho vào đĩa petri, đường kính 10cm chứa môi trường PGA. Nuôi trong tủ định ôn ở nhiệt độ 250C. Sau 48 giờ bào tử nảy mầm và phát triển trên bề mặt môi trường, chúng được nhận dạng rồi cấy chuyền sang môi trường PGA trên đĩa petri. Cấy chuyền đến khi không còn tạp nhiễm các loài nấm khác. Kiểm tra dưới kính hiển vi và phân loại chúng. Lưu giữ nguồn nấm trong môi trường bột bắp, 2% đường Dextrose trong ống nghiệm.